Solo para diagnóstico in vitro y uso profesional.
Nombre
Kit de prueba ELISA de Anti-Ct IgG (Suero/Plasma)
USO PREVISTO
Este kit es una detección cualitativa de Chlamydia trachomatis (Ct) IgG en suero/plasma humano. El kit es
adecuado para el cribado clínico y el diagnóstico de la infección por Ct en suero/plasma.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
El antígeno de Ct se absorbe en fase sólida en la microplaca de reacción de poliestireno. Si hay anticuerpos IgG contra Ct
en la muestra de prueba, se une al antígeno de Ct recubierto en la microplaca, forma un complejo antígeno-anticuerpo y luego
se une al anticuerpo anti-marcado con enzima y forma un complejo antígeno-anticuerpo-anticuerpo en la superficie
de la microplaca, y muestra un color azul en el pocillo correspondiente a través de la acción del sustrato. Por lo tanto, puede
detectar específicamente la IgG contra Ct en suero/plasma humano.
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
1. Equilibrar todos los reactivos a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de su uso.
2. Diluir el tampón de lavado a una dilución de 1:40 con agua destilada antes de su uso.
3. Añadir 100 µL de diluyente de muestra en el pocillo correspondiente (No añadir en el pocillo en blanco, los pocillos de control negativo y el pocillo de control positivo). La muestra debe corresponder al número de microplacas, cada placa debe disponer de 2 pocillos de control negativo, 1 pocillo de control positivo y 1 pocillo de control en blanco. Añadir 5 µL de muestra en el pocillo correspondiente, mezclar a fondo con la pipeta, añadir
50 µL de control negativo y control positivo a los pocillos de control negativo y control positivo (No
añadir en el pocillo en blanco).
Nota: Utilizar una punta de pipeta desechable separada para cada espécimen, control negativo y control positivo para
evitar la contaminación cruzada.
4. Agitar suavemente para mezclar durante 30 segundos. Incubar a 37 °C durante 20 minutos con la membrana de sellado de la placa
sellando la placa.
5. Al final de la incubación, retirar y desechar la cubierta de la placa. Sacar, añadir tampón de lavado a
cada pocillo durante 20 segundos. Repetir 5 veces. Después del ciclo de lavado final, invertir la placa sobre
papel secante o toalla limpia y golpear para eliminar cualquier residuo.
6. Añadir respectivamente 50 µL de conjugado enzimático (No añadir en el pocillo en blanco)
7. Incubar a 37 °C durante 20 minutos con la membrana de sellado de la placa sellando la placa. Repetir el
paso de lavado 5 veces como en el paso 5.
8. Añadir 50 µL de Sustrato A y 50 µL de Sustrato B (No añadir en el pocillo en blanco). Incubar a 37 °C durante
10 minutos con la membrana de sellado de la placa sellando la placa.
9. Añadir 50 µL de Solución de Parada a cada pocillo (No añadir en el pocillo en blanco). Mezclar suavemente agitando, leer la
absorbancia en un plazo de 10 minutos después de detener la reacción. Calibrar el lector de microplacas con el pocillo en blanco
y leer la absorbancia a 450 nm. Si se utiliza un instrumento de doble filtro, ajustar la longitud de onda de referencia
a 630 nm. No se permite ningún pocillo en blanco si se utiliza doble longitud de onda para la detección. Calcular el
valor de corte y evaluar los resultados.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Cronometría: Leer la densidad óptica (DO) de la muestra a 450 nm con un lector de microplacas.
Si el valor medio de DO del control negativo es ≤ 0,1 y el valor medio de DO del control positivo es ≥ 0,8, la prueba es válida,
de lo contrario, la prueba no es válida.
Valor de corte (C.O.) = El valor medio de DO del control negativo x 3 (Calculado como 0,10 cuando el valor medio
de DO del control negativo es
< 0,10, calculado por el valor real cuando el valor medio de DO del control negativo
es > 0,10)
Resultados positivos: Valor de DO de la muestra ≥ C.O.
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