Equipos antis de la prueba del anticuerpo de Elisa Test Kit Anti TPO de la peroxidasa de la tiroides

Peroxidasa anti-TPO Elisa Kit del antitiroideo

1. Uso previsto

Immunoensayo para la determinación cuantitativa in vitro de anticuerpos a la peroxidasa de la tiroides en suero humano. La determinación anti del ‐ TPO se utiliza como ayuda en la diagnosis de las enfermedades de tiroides autoinmunes.

2. Resumen

• La peroxidasa específica del ‐ de la tiroides (TPO) está presente en los microsomas de thyrocytes y se expresa en su superficie apical de la célula. En sinergia con la tiroglobulina (Tg) esta enzima tiene una función esencial en la yodación de L tirosina del ‐ y el acoplamiento químico del mono ‐ e iodotyrosine resultantes de di ‐ para formar las hormonas tiroideas T4, T3, y pie3s.
• TPO es un autoantigen potencial. Los títulos elevados del suero de anticuerpos a TPO se encuentran en varias formas de tiroiditis causadas por la autoinmunidad. La calma encontró con frecuencia que el término “anticuerpo microsomal” origina a partir del tiempo en que TPO todavía no había sido identificado como antígeno en la autoinmunidad causada por los microsomas. En el sentido clínico el ‐ anti TPO de dos términos y el anticuerpo microsomal se pueden utilizar sinónimo; hay diferencias, sin embargo, con respecto a los métodos de prueba.
• Los altos títulos antis del ‐ TPO se encuentran en el hasta 90% de pacientes con la tiroiditis de Hashimoto crónico. En la enfermedad de sepulcros, los 70% de los pacientes tienen un título elevado. Aunque la sensibilidad del procedimiento pueda ser aumentada simultáneamente determinando otros anticuerpos de la tiroides (‐ anti Tg, anticuerpo del ‐ del receptor del ‐ de TSH - TRAb), un hallazgo negativo no elimina la posibilidad de una enfermedad autoinmune. La magnitud del título del anticuerpo no correlaciona con la actividad clínica de la enfermedad. Los títulos inicialmente elevados pueden llegar a ser negativos después de períodos muy largos de enfermedad o durante la remisión. Si reaparecen los anticuerpos remisión de siguiente, después una recaída es probable.
• Considerando que las pruebas microsomales usuales del anticuerpo emplean microsomas sin purificar como preparación del antígeno, las pruebas antis del ‐ TPO utilizan una peroxidasa purificada. Los dos procedimientos están de funcionamiento comparable en términos de sensibilidad clínica, pero un mejor ‐ de la porción a la consistencia de la porción del ‐ y a una especificidad clínica más alta se puede esperar del ‐ anti TPO prueba debido al más de alta calidad del antígeno utilizó. La enzima ligó análisis del inmunosorbente utiliza los anticuerpos anti-humanos humanos de IgG del antígeno y del conejo (antis-IgG).

3. Principio de la prueba

Método indirecto, duración total del análisis: 70 minutos.

El ELISA anti-TPO emplea la fase sólida, método indirecto de ELISA para la detección de anticuerpos a TPO en el procedimiento de dos etapas de la incubación. Las tiras del microwell del poliestireno son pre- cubiertas con los antígenos humanos altamente immunoreactive de TPO. Durante el primer paso de la incubación, los anticuerpos específicos antis-TPO, si son presentes, estarán limitados a la fase sólida cubrieron primero los antígenos de TPO. Los pozos se lavan para quitar las proteínas de suero desatadas, y los anticuerpos anti-humanos de IgG del conejo (antis-IgG) conjugados a la peroxidasa del rábano picante de la enzima (conjugación de HRP-) se añaden. Durante el segundo paso de la incubación, estos anticuerpos HRP-conjugados estarán limitados a cualquier complejo del antígeno-anticuerpo (IgG) formaron previamente y la HRP-conjugación desatada entonces es quitada lavándose. Las soluciones del cromógeno que contienen Tetramethylbenzidine (TMB) y el peróxido de la urea se añaden a los pozos y en la presencia del immunocomplex antígeno-anticuerpo-anti-IgG (HRP), los cromógenos descoloridos son hidrolizados por la conjugación encuadernada de HRP a un producto azul-coloreado. El color azul da vuelta amarillo después de parar la reacción con el ácido sulfúrico.

La cantidad de intensidad del color puede ser medida y es proporcional a la cantidad de anticuerpo capturada en los pozos, y a la cantidad de anticuerpo en la muestra respectivamente.

4. Los materiales los reactivo proporcionaron

• Microplate cubierto, 8 X12 tiras, 96 pozos. Cubierto primero con el antígeno humano de TPO.

• Calibradores, 6 frascos, 1 ml cada uno, listos para utilizar; Concentraciones: 0 (A), 25 (B), 50 (C), 100 (D), 250 (E) y 500 (F) IU/mL.

• La conjugación de la enzima, 1 frasco, 11,0 ml de HRP (peroxidasa del rábano picante) etiquetó el conejo los anticuerpos humanos antis de IgG (antis-IgG) en el almacenador intermediario Tris-NaCl que contenía BSA (albúmina del suero vacuno). Contiene 0,1% preservativos ProClin300.

• Diluyente del suero: 1 frasco, 11mL. Contener sales del almacenador intermediario y un tinte

• Concentrado de la solución del lavado, 1 frasco, 25 ml (40X concentró), solución del lavado del PBS-tween.

• Substrato, 1 frasco, 11ml, listo para utilizar, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Pare la solución, 1 frasco, 6,0 ml de 1 mol/l del ácido sulfúrico.

• IFU, 1 copia.

• Tapa de la placa: 2 pedazos.

Materiales requeridos (pero no proporcionado)

• Lector de Microplate con capacidad absorbente de la longitud de onda 450nm y 620nm.

• Lavadora de Microplate.

• Incubadora.

• Coctelera de la placa.

• Micropipetas y micropipetas de varios canales que entregan 50µl con una precisión de mejor de 1,5%.

• Papel absorbente.

• Agua destilada

5. Método de prueba

• Utilice solamente el número de pozos requeridos y dé formato a los pozos del microplate para que cada calibrador y muestra sean probados.

• Añada el µL 100 de calibradores a cada pozo.

• Añada el µL 100 del diluyente de la muestra (color verde) a cada pozo excepto los Calibrador-pozos.

• Añada el µL 10 de la muestra a cada pozo del diluyente de la muestra (NOTA: Los reactivo en Wells darán vuelta a color azul del verde), después sacuden 30 segundos.

• Cubra la placa con una tapa de la placa e incube en el °C 37 por 30 minutos.

• Deseche el contenido de la placa micro por la decantación o la aspiración. Si decanta, golpee ligeramente y borre el seco de placa con el papel absorbente.

• Añada el µL 350 de la solución del lavado, decántelo (golpecito y mancha blanca /negra) o aspírelo. Repita 4 veces adicionales para un total de 5 lavados. En el final del lavado, invierta la placa y golpee ligeramente hacia fuera cualquier solución residual del lavado sobre el papel absorbente.

• Añada el µL 100 de la conjugación de la enzima,

• Cubra la placa con una tapa de la placa e incube en el °C 37 por 30 minutos.

• Añada el µL 350 de la solución del lavado, decántelo (golpecito y mancha blanca /negra) o aspírelo. Repita 4 veces adicionales para un total de 5 lavados. En el final del lavado, invierta la placa y golpee ligeramente hacia fuera cualquier solución residual del lavado sobre el papel absorbente.

• Añada el µL 100 del substrato a cada pozo. Cubra e incube en la temperatura ambiente (18-25℃) en la oscuridad para la reacción por 10 minutos. No sacuda la placa después de la adición del subestado.

• Añada el µL 50 de la solución de la parada a cada pozo.

• Sacuda por 15-20 segundos para mezclar el líquido dentro de los pozos. Es importante asegurarse de que los cambios azules del color a amarillear totalmente.

• Lea la absorción de cada pozo en 450 nanómetro (usando 620 a 630 nanómetro como la longitud de onda de la referencia para minimizar imperfecciones bien) en un lector micro de la placa. Los resultados se deben leer en el plazo de 30 minutos de adición paran la solución.