1.Calcular el número deseado de microcuencas.
Bolsas de plástico resecables, selladas y almacenadas a 2-8°C para su posterior uso.
2. Añadir calibradores y muestras:
2. 1 Pozo en blanco: no añadir reactivos.
2. 2 Pozos de calibración: añadir 100 μL de calibradores en los pozos de control designados.
2.3 Pozos de ensayo: añadir 100 UL de diluyente de muestras a los pozos de ensayo, y luego añadir 10 UL de muestras en el pozo correspondiente.
2.4 Agitar suavemente la placa durante 20 segundos y cubrirla con el sellador.
3Incubar:Incubar el plato a 37°C durante 30 minutos.
4. Paso de lavado (puede realizarse manualmente o con lavado automático):
Lavado manual: retire cuidadosamente la mezcla de incubación desechando la solución en un recipiente de residuos.
Se secan con 350 μl de tampón de lavado diluido y se agitan suavemente durante 20 a 30 segundos.
Después de completar el último paso de lavado, golpee la placa sobre el papel absorbente para eliminar el líquido residual.
Lavado automático: La lavadora automática de platos debe estar calibrada para garantizar un lavado eficiente.
Diluir el tampón de lavado y remojar durante 20 a 30 segundos.
5. Conjugado: añadir 100 μL de conjugado en cada pozo, excepto en el pozo en blanco.
6Incubar: cubrir los pozos e incubar a 37°C durante 30 minutos.
7Paso de lavado: Lavar el plato 5 veces como se describe en el paso 4.
8Substrato: añadir 50 μL de Substrato A y 50 μL de Substrato B en cada pozo, incluido el pozo en blanco.
Incubación a 37°C en la oscuridad durante 15 minutos.
9. Solución de parada: añadir 50 μL de solución de parada a cada pozo. Un color amarillo debe desarrollarse en los pozos que contienen muestras positivas.
10. Lectura de los resultados: lectura a 450/630-700 nm en 30 minutos.
1Nota: La microplaca también se puede leer a 450 nm, pero se recomienda encarecidamente que se lea a 450/630-700 nm para los
mejores resultados.
Cronometría: Leer la densidad óptica (OD) de la muestra a 450 nm con un lector de microplacas.
El valor medio de OD del control negativo ≤ 0,1 y el valor medio de OD del control positivo ≥ 0.8, el ensayo es válido,
de lo contrario, la prueba no es válida.
Valor de corte (CO) = El valor medio de OD del control negativo x 3 (Calculado por 0,10 cuando la media
el valor de OD del control negativo es < 0.10, calculado por el valor real cuando el control negativo medio OD
Resultados positivos: valor de OD de la muestra ≥ CO.
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