El virus del dengue es un flavivirus que se encuentra principalmente en las zonas tropicales y subtropicales.
Los virus del dengue se transmiten por mosquitos, principalmente por el Aedes aegypti y el Aedes albopictus.
Los virus del dengue transmitidos por mosquitos (serotipo 1-4) causan fiebre del dengue, una enfermedad grave similar a la gripe.
En la actualidad, el número de casos de tuberculosis en las regiones tropicales del tercer mundo y la propagación a los países desarrollados subtropicales, incluidos los Estados Unidos.
que entre 50 y 80 millones de casos de dengue se producen en todo el mundo cada año, incluyendo una forma potencialmente mortal de la enfermedad llamada
La infección primaria con el virus del dengue resulta en una autoinfección por el virus del dengue.
enfermedad limitante caracterizada por fiebre leve a alta que dura de 3 a 7 días, dolor de cabeza intenso con dolor detrás de los ojos,
La infección secundaria es la forma más común de la enfermedad en muchas partes del sudeste.
En la mayoría de los casos, los síntomas clínicos más graves son los que se presentan en el seno de la familia y en el seno de la familia.
Los síntomas pueden incluir fiebre alta, hemorragias y insuficiencia circulatoria, y la tasa de mortalidad puede alcanzar el 40%.
El diagnóstico de SDS es particularmente importante, ya que los pacientes pueden morir dentro de las 12 a 24 horas si no se les administra un tratamiento adecuado.
administrado.
La infección primaria por el virus del dengue se caracteriza por elevaciones de los niveles de antígeno NS1 específico de 0 a 9 días después del inicio de la enfermedad.
El diagnóstico precoz del dengue reduce el riesgo de complicaciones como la DHF o la DSS,
especialmente en los países donde el dengue es endémico.
Procedimiento de ensayo
1Todos los reactivos deben dejarse alcanzar la temperatura ambiente durante 15 minutos antes de su uso.
2. Diluir el tampón de lavado a una velocidad de 1:40 con agua destilada antes de usar.
3. Añadir 100μL de diluyente de muestra en el pozo correspondiente, añadir 10μL de muestra en el pozo correspondiente (no añadir en el pozo en blanco). Mezclar bien utilizando la pipeta.Añadir 100 μL de control positivo y control negativo al pozo de control positivo y al pozo de control negativoLa muestra debe corresponder al número de microplacas, cada placa debe estar provista de 2 pozos de control negativo, 1 control positivo y 1 control en blanco.
Nota: Para evitar la contaminación cruzada, utilizar una punta de pipeta de eliminación separada para cada muestra, control negativo y positivo.
4Agitar suavemente para mezclar durante 30 minutos. Incubar a 37°C durante 30 minutos con la membrana de la placa de sellado que sella la placa.
5. Al final de la incubación, retire y deseche la cubierta de la placa. Retire, agregue tampón de lavado a cada pozo durante 20 segundos. Repita 5 veces. Después del ciclo de lavado final, use el tampón de lavado de cada pozo.Poner el plato sobre papel de limpieza o toalla limpia, y golpee para eliminar cualquier residuo.
6. respectivamente añadiendo el conjugado 50 μL (no añadir en el pozo en blanco).
7Incubar a 37°C durante 30 minutos con la membrana de la placa de sellado que sella la placa.
8. Añadir el sustrato A (50μL) y el sustrato B (50μL) (no añadir en el pozo en blanco).
9. Añadir 50μL de solución de suspensión a cada pozo (no añadir en el pozo en blanco). mezclar suavemente agitando, leer la absorbancia dentro de los 10 minutos posteriores a la interrupción de la reacción.Calibrar el lector de placas con el pozo en blanco y leer la absorbancia a 450nmSi se utiliza un instrumento de doble filtro, establecer la longitud de onda de referencia en 630 nm. No se permiten pozos en blanco si se utiliza doble longitud de onda para detectar. Calcular el valor de corte y evaluar los resultados.
Almacenamiento
• Conservar a una temperatura de 2 a 8°C.
• Colocar los pozos no utilizados en la bolsa de aluminio de cartón con cierre de cremallera y volver a 2-8 °C, en cuyas condiciones los pozos se mantendrán estables durante 2 meses,o hasta la fecha de caducidad indicada, la que sea anterior.
• Sellar y devolver los calibradores no utilizados a 2-8 °C, en cuyas condiciones la estabilidad se mantendrá durante 1 mes, para un uso más prolongado, guardar los calibradores abiertos en aliquotas y congelar a 20 °C.Evitar múltiples ciclos de congelación y descongelación.
• Sellar y devolver todos los demás reactivos no utilizados a 2-8 °C, en cuyas condiciones la estabilidad se mantendrá durante 2 meses, o hasta la fecha de caducidad indicada, la que sea anterior.
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