Kit de ensayo ELISA de anticuerpos (IgE)

Uso previsto

  Este kit es una detección cuantitativa del anticuerpo IgE total (IgE) en suero/plasma humano in vitro.En pacientes con sospecha de enfermedades parasitarias, también se puede recomendar la prueba de IgE total..

PRINCIPIO de la prueba

  La hipersensibilidad inmediata (alergias de tipo I) es mediada por IgE específica.el aumento de la IgE específica en los pacientes se acompaña de un aumento del título total de IgEEn este caso, el título puede subir hasta 1.000 veces. En general, las unidades internacionales por mililitro (UI/mL) se definen como: 1 UI/mL es igual a 2,4 ng de IgE. En pacientes con dermatitis alérgica hereditaria, el nivel de IgE puede ser de hasta 1 mg/mL.Los niveles de IgE pueden ser tan altos como 50Además, los títulos de IgE son elevados en pacientes con enfermedades parasitarias. Los resultados de las pruebas más altos de lo normal también deben tener en cuenta el impacto de enfermedades autoinmunes confirmadas.

El reactivo no se recomienda para el examen físico de personas sanas, los resultados de las pruebas positivos o negativos sólo en nombre de los resultados positivos o negativos de las pruebas de anticuerpos IgE correspondientes,correlación con el paciente está enfermo y puede no ser como el único índice de evaluación de los pacientes, debe combinarse con la presentación clínica del paciente y otras pruebas de laboratorio para el análisis integrado de la enfermedad.

El método de detección de este kit es el inmunoensayo ligado a enzimas.Los anticuerpos monoclonales que reconocen anti-IgE fueron pre-revestidos en los pozos de la microplaca, y muestras de suero/plasma humano y otro anticuerpo monoclonal etiquetado con enzimas se añadieron a los poros de la placa.Se leyó el valor de OD y se calculó su contenido mediante un lector de microplacas.

Procedimiento de ensayo

1.Todos los reactivos deben dejarse alcanzar la temperatura ambiente durante 15 minutos antes de su uso.

2. Diluir el tampón de lavado a una velocidad de 1:40 con agua destilada antes de usar.

3La muestra debe corresponder al número de placas micro, cada placa debe estar provista de pozos de referencia (el número de pozos se determina por la referencia y la muestra a probar).

Nota: Se utilizará una punta de pipeta de eliminación separada para cada muestra, con cada referencia para evitar la contaminación cruzada.

4.Añadir 100 μl de diluyente de muestra en el pozo correspondiente, añadir 20 μl de cada referencia S0, S1, S2, S3, S4, S5 y muestra respectivamente al pozo correspondiente.

5Agitar suavemente para mezclar, incubar a 37°C durante 30 minutos con la membrana de la placa de sellado.

6. Al final de la incubación, retire y deseche la cubierta de la placa. Retire, añada tampón de lavado a cada pozo durante 10 segundos. Repita 5 veces. Después del ciclo de lavado final, use el tampón de lavado de cada pozo.Poner el plato sobre papel de limpieza o toalla limpia, y golpee para eliminar cualquier residuo.

7Se añade el conjugado 100 μL. Se incuban a 37 °C durante 30 minutos con la membrana de la placa de sellado que sella la placa.

8Lavar el plato como en el paso 6.

9. Añadir el sustrato A (50μL) y el sustrato B (50μL). Agitar suavemente para mezclar. Incubar a 37°C durante 10 minutos con la membrana de la placa de sellado que sella la placa.

10Añadir 50 μl de solución de suspensión a cada pozo. Mezclar suavemente agitando, leer la absorbancia dentro de los 10 minutos posteriores a la interrupción de la reacción.Luego, leer el valor de absorbancia a 450nm/ 630nm con el lector de microplacas.Calcular la concentración y evaluar los resultados.