Prueba estimulante de la hormona de la tiroides de la PRUEBA de la tirotropina TSH ELISA

EQUIPO caliente de la PRUEBA de la venta TSH ELISA
Referencia: Pruebas DS177701 96

Uso previsto
Immunoensayo para la determinación cuantitativa in vitro de la tirotropina en suero humano.

1. Resumen

• la hormona Tiroides-estimulante (TSH, tirotropina) es una glicoproteína que tiene un peso molecular de aproximadamente 30000 daltons y que consiste en dos subunidades.
• La medida del suero de la concentración de la tirotropina a menudo (TSH), de una glicoproteína con un peso molecular de 28.000 daltons y secretado del pituitario anterior, se mira generalmente como el indicador más sensible disponible para la diagnosis del hipotiroidismo (pituitario) primario y secundario (1,2).
• Las medidas de TSH son igualmente útiles en el distinción de hipotiroidismo (hipotalámico) secundario y terciario de la enfermedad de tiroides primaria. La liberación de TSH del pituitario es regulada por el factor que libera de la tirotropina (TRH), que es secretada por el hipotálamo, y por la acción directa de T4 y del triiodothyronine (T3), las hormonas tiroideas, en el pituitario.
• Los niveles del aumento de T3 y de T4 reducen la respuesta del pituitario a los efectos estimulantes de TRH. En hipotiroidismo secundario y terciario, las concentraciones de T4 son generalmente bajas y los niveles de TSH son generalmente bajos o normales. La deficiencia pituitaria de TSH (hipotiroidismo secundario) o la escasez del estímulo del pituitario por TRH (hipotiroidismo terciario) causa esto.
• La prueba del estímulo de TRH distingue estas condiciones. En hipotiroidismo secundario, la respuesta de TSH a TRH se embota mientras que una respuesta normal o retrasada se obtiene en hipotiroidismo terciario. Además, el advenimiento de análisis immunoenzymometric ha proveído del laboratorio suficiente sensibilidad para permitir el distinción del hipertiroidismo de la población eutiroide y ampliar la utilidad de las medidas de TSH. Este método es un análisis de segunda generación, que proporcionan los medios para la discriminación en la gama hyperthyroid-eutiroide. (3)

2. Los materiales los reactivo proporcionaron
• Microplate cubierto, 8 X12 tiras, 96 pozos, cubiertos primero con anti-TSH monoclonal del ratón.
• Calibradores, 6 frascos, 1 ml cada uno, listos para utilizar; Concentraciones: 0 (A), 0,5 (B), 2 (C), 5 (D), 10 (E) y 25 (F) μIU/mL.
• La conjugación de la enzima, 1 frasco, 6,0 ml de HRP (peroxidasa del rábano picante) etiquetó el ratón anti-TSH monoclonal en el almacenador intermediario Tris-NaCl que contenía BSA (albúmina del suero vacuno). Contiene 0,1% preservativos ProClin300.
• Substrato, 1 frasco, 11ml, listo para utilizar, (tetramethylbenzidine) TMB.
• Pare la solución, 1 frasco, 6,0 ml de 1 mol/l del ácido sulfúrico.
• Concentrado de la solución del lavado, 1 frasco, 25 ml (40X concentró), solución del lavado del PBS-tween.
• IFU, 1 copia.
• Tapa de la placa: 1 pedazo.

Materiales requeridos (pero no proporcionado)
• Lector de Microplate con capacidad absorbente de la longitud de onda 450nm y 620nm.
• Lavadora de Microplate.
• Incubadora.
• Coctelera de la placa.
• Micropipetas y micropipetas de varios canales que entregan 50μl con una precisión de mejor de 1,5%.
• Papel absorbente.
• Agua destilada

3. Método de prueba

Asegúrese que las muestras, los calibradores, y los controles de los pacientes estén en la temperatura ambiente (℃ 18-25) antes de medida. Mezcle todos los reactivo con suavemente la inversión antes de uso.

• Utilice solamente el número de pozos requeridos y dé formato a los pozos de los microplates para que cada calibrador y muestra sean probados. • Añada el µL 25 de calibradores o de muestras a cada pozo.

• Añada el µL 100 de la conjugación de la enzima a cada pozo.

• Sacuda el microplate suavemente por 30 segundos para mezclarse.

• Cubra la placa con una tapa de la placa e incube en 37℃ por 60 minutos.

• Deseche el contenido de la placa micro por la decantación o la aspiración. Si decanta, golpee ligeramente y borre el seco de placa con el papel absorbente.

• Añada el µL 350 de la solución del lavado, decántelo (golpecito y mancha blanca /negra) o aspírelo. Repita 4 veces adicionales para un total de 5 lavados. Una lavadora automatizada de la tira del microplate puede ser utilizada. En el final del lavado, invierta la placa y golpee ligeramente hacia fuera cualquier solución residual del lavado sobre el papel absorbente.

• Añada el µL 100 del substrato a cada pozo.

• Cubra e incube en la temperatura ambiente (18-25℃) en la oscuridad para la reacción por 20 minutos. No sacuda la placa después de la adición del subestado.

• Añada el µL 50 de la solución de la parada a cada pozo.

• Sacuda por 15-20 segundos para mezclar el líquido dentro de los pozos. Es importante asegurarse de que los cambios azules del color a amarillear totalmente.

• Lea la absorción de cada pozo en 450 nanómetro (usando 620 a 630 nanómetro como la longitud de onda de la referencia para minimizar imperfecciones bien) en un lector micro de la placa. Los resultados se deben leer en el plazo de 30 minutos de adición paran la solución