Nombre del producto

Kit de detección RT-PCR en tiempo real del virus de la hepatitis D

Uso previsto

Para elen el laboratorio detección cualitativa del ARN del VHDEn el suero o plasma humano.diagnóstico, seguimiento y cuantificación de la carga viralde infección por el virus de la hepatitis D.

Parámetros técnicos:

Principio de la prueba

• RT-PCR en tiempo real: se dirige a una región conservada de laGenoma del VHD(por ejemplo,R0o bienHDAggen) utilizandoPrimers específicos de secuencia y sondas TaqMan(por ejemplo, etiquetado con FAM).

• Alta sensibilidad y especificidad: No hay reactividad cruzada con el VHB, el VHC u otros virus de la hepatitis.

• Control interno (CI): Incluido para controlar la extracción de ARN y la inhibición de la PCR (por ejemplo, control de la RNasa P o del ARN sintético).

Componentes del kit

1. Mix maestro RT-PCRContiene:transcriptasa inversa, Taq polimerasa de arranque en caliente, dNTP y búfer optimizado.

2. Mezcla de primeras y sondas: oligonucleótidos específicos del VHD con sonda fluorescente (por ejemplo, FAM para el VHD, HEX/VIC para el IC).

3. Los controles:

   • Control positivo: ARN HDV sintético o virus inactivado.

   • Control negativo: Agua libre de nucleasas.

   • Control interno(si se incluye).

4. Otros reactivos: DNasa/RNasa libre de agua, tubos de reacción (si se proporciona).

Flujo de trabajo

1. Preparación de las muestras: Extracción de ARN viral (compatible conQIAamp, MagMAX o sistemas automatizados)).

2. Configuración de la PCR: Mezclar el ARN extraído con la mezcla maestra y los primers/sonedas.

3. Amplificación:

   • Transcripción inversa: 50°C durante 10 ̊15 min.

   • Actividad de la PCR95 °C durante 2 ̊5 min.

   • Ciclismo: 40°45 ciclos de 95°C (10 segundos) → 60°C (30°60 segundos, lectura de fluorescencia).

4. Análisis:

   • Cuantitativo: Curva estándar para la carga viral (UI/mL o copias/mL).

   • Calidad: Valor límite de Ct para resultados positivos/negativos.

Características de rendimiento

• Sensibilidad:≤ 10 ‰ 50 UI/ml(95% LOD).

• Rango lineal:102 ‰ 108 UI/ml(conjuntos cuantitativos).

• Especificidad: No hay reactividad cruzada con el VHB, el VHC, el VIH u otros patógenos comunes.

• Precisión: CV < 5% para la variabilidad dentro y entre ensayos.

•