VCAM-1 RUO Kit Elisa Molécula de adhesión de células endotelial vascular humana 1

Descripción del producto:

Objetivo

Este kit permite determinar las concentraciones de VCAM-1 en suero humano, supernatos de cultivo celular y otros fluidos biológicos.

Principio del ensayo

El kit analizará el nivel de VCAM-1 humano en la muestra, utilizar el anticuerpo VCAM-1 humano purificado para recubrir los pozos de la placa de microtiter, hacer anticuerpos de fase sólida, luego añadir VCAM-1 a los pozos,Anticorpo VCAM-1 combinado que con HRP marcado, se convierte en anticuerpo-antígeno-enzima-anticuerpo complejo, después de lavar completamente, añadir TMB solución de sustrato, TMB sustrato se vuelve de color azul en HRP enzimático-catalizado,La reacción se termina con la adición de una solución de ácido sulfúrico y el cambio de color se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nmLa concentración de VCAM-1 humano en las muestras se determina comparando la D.O. de las muestras con la curva estándar.

Materiales suministrados junto con el kit

Parámetros técnicos:

Requisitos de muestra

• Se recomienda extraer el espécimen lo antes posible después de su recogida, de acuerdo con la literatura pertinente, y realizar el experimento lo antes posible después de la extracción.la muestra puede mantenerse a -20 °C para preservar, Evite ciclos de congelación y descongelación repetidos.
• No se puede detectar la muestra que contiene NaN3, porque NaN3 inhibe el HRP activo.

Procedimiento de evaluación

• Diluir y añadir muestra:Diluir Norma de densidad original según la siguiente tabla:

2. Añadir muestra: establecer pozos en blanco por separado (los pozos de comparación en blanco no añaden muestra y reactivo HRP-Conjugate, sino que cada paso de la operación es el mismo).Añadir 50 μl de estándar a la tira de Microelisa, añadir 40μl de dilución de muestra al pozo de prueba, luego añadir 10μl de muestra (la dilución final de la muestra es de 5 veces), añadir la muestra a los pozos, no tocar la pared del pozo tanto como sea posible, y mezclar suavemente.

3Incubar: después de cerrar la placa con la membrana de la placa de cierre, incubar durante 30 minutos a 37°C.

4. Configurar líquido: solución de lavado 30 veces (o 20 veces) diluida 30 veces (o 20 veces) con agua destilada y reserva.

5. Lavado: Descubre la membrana de la placa de cierre, desecha el líquido, seque con el columpio, agrega el amortiguador de lavado a cada pozo, permanezca durante 30 segundos y luego drena, repita 5 veces, seque con una palmada.

6. Añadir enzima: añadir 50 μl de reactivo HRP-Conjugado a cada pozo, excepto el pozo en blanco.

7Incubación: operación con 3.

8Lavado: operación con 5.

9. Color: añadir solución de cromógeno A 50ul y solución de cromógeno B 50ul a cada pozo, evitar la conservación de la luz durante 10 minutos a 37 °C

10. Detener la reacción: añadir Stop Solution50μl a cada pozo, detener la reacción ((el cambio de color azul a amarillo).

11. Análisis: tomar el pozo en blanco como cero, leer la absorbancia a 450nm después de añadir solución de parada y dentro de 15min

Calculación:

Tome la densidad estándar como horizontal, el valor OD para la vertical, dibuja la curva estándar en papel gráfico,Encontrar la densidad correspondiente de acuerdo con el valor de la muestra OD por la curva de la muestra, multiplicado por el múltiplo de dilución, o calcular la ecuación de regresión en línea recta de la curva estándar con la densidad estándar y el valor de OD, con el valor de OD de la muestra en la ecuación,calcular la densidad de la muestra, multiplicado por el factor de dilución, se obtiene la densidad real de la muestra.