Heme libre humano RUO ELISA Kit de análisis de investigación USO ÚNICO Para diagnóstico médico

Objetivo:

Este kit permite determinar las concentraciones de hemo libre en sangre entera.

Principio del ensayo

El kit analizará el nivel de hemo libre humano en la muestra, usar el anticuerpo de hemo libre humano purificado para recubrir los pozos de la placa de microtiter, hacer anticuerpos de fase sólida, luego agregar hemo libre a los pozos,Anticorpo libre hemo combinado que con HRP marcado, se convierte en anticuerpo-antígeno-enzima-anticuerpo complejo, después de lavar completamente, añadir TMB solución de sustrato, TMB sustrato se vuelve de color azul en HRP enzimático-catalizado,La reacción se termina con la adición de una solución de ácido sulfúrico y el cambio de color se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nmLa concentración de hemo humano libre en las muestras se determina comparando la D.O. de las muestras con la curva estándar.

Parámetros técnicos:

Materiales suministrados con el kit:

Requisitos de muestra

• Se recomienda extraer el espécimen lo antes posible después de su recogida, de acuerdo con la literatura pertinente, y realizar el experimento lo antes posible después de la extracción.la muestra puede mantenerse a -20 °C para preservar, Evite ciclos de congelación y descongelación repetidos.
• No se puede detectar la muestra que contiene NaN3, porque NaN3 inhibe el HRP activo.

Procedimiento de evaluación

• Diluir y añadir muestra:Diluir Norma de densidad original según la siguiente tabla:

2. añadir muestra:Configurar los pozos en blanco por separado (los pozos de comparación en blanco no añaden muestra y reactivo HRP-Conjugate, de lo contrario cada paso de la operación es el mismo).Añadir 50 μl de estándar a la tira de Microelisa, añadir dilución de muestra de 40μl al pozo de prueba de la muestra, luego añadir la muestra de prueba de 10μl (la dilución final de la muestra es de 5 veces), añadir la muestra a los pozos, no tocar la pared del pozo en la medida de lo posible, y mezclar suavemente.

3.Incubar: después de cerrar la placa con la membrana de la placa de cierre, incubar durante 30 min a 37°C.

4.Configurar líquido: solución de lavado 30 veces (o 20 veces) diluida 30 veces (o 20 veces) con agua destilada y reserva.

5.lavado: Descubrir la membrana de la placa de cierre, desechar el líquido, secar con un columpio, añadir tampón de lavado a cada pozo, permanecer durante 30 segundos y luego drenar, repetir 5 veces, secar con una palmada.

6. añadir enzima: añadir 50 μl de reactivo HRP-Conjugado a cada pozo, excepto pozo en blanco.

7.Incubación: operación con 3.

8.lavado: Operación con 5.

9.color: añadir a cada pozo la solución de cromógeno A 50ul y la solución de cromógeno B 50ul, evitar la conservación de la luz durante 10 minutos a 37°C

10.Detener la reacción: Añadir solución de parada50μl a cada pozo, detener la reacción ((el cambio de color azul a amarillo).

11. ensayo: tomar el pozo en blanco a cero, leer la absorbancia a 450 nm después de añadir la solución de parada y dentro de los 15 min.

Calculación

Tome la densidad estándar como horizontal, el valor OD para la vertical, dibuja la curva estándar en papel gráfico,Encontrar la densidad correspondiente de acuerdo con el valor de la muestra OD por la curva de la muestra, multiplicado por el múltiplo de dilución, o calcular la ecuación de regresión en línea recta de la curva estándar con la densidad estándar y el valor de OD, con el valor de OD de la muestra en la ecuación,calcular la densidad de la muestra, multiplicado por el factor de dilución, se obtiene la densidad real de la muestra.