MPXV PCR Virus de la viruela del mono detección de PCR múltiple congelado en tiempo real

Procedimiento de operación

1) Extracción de ácido nucleico Extraer ADN de las muestras con un kit de extracción adecuado.Se recomienda eludir el ácido nucleico con aproximadamente 100 μl de búfer de elución (TE o H2O libre de nucleasas) en el paso final de la extracción.El ácido nucleico purificado debe utilizarse inmediatamente o almacenarse a -20°C.

2) Preparación del control positivo El control positivo puede almacenarse a temperatura ambiente antes de la rehidratación durante hasta 12 meses.Se debe rehidratar antes del uso añadiendo 250 μl de tampón TE o H2O libre de nucleasasSe utilizará inmediatamente o se conservará a -20°C.

3) Preparación de la mezcla RT-PCR en tiempo real

A) Abrir el envase al vacío y sacar las tiras de 8 tubos que contienen el reactivo.Si los tubos suministrados no son compatibles con su instrumento, transfiera el pellete de reactivo a un tubo óptico compatible con su instrumento.

B) Abra los tubos y deseche la tapa (no adecuada para máquinas de PCR en tiempo real) y prepare la mezcla de reacción sobre hielo como se muestra a continuación.

* Se puede utilizar agua libre de nucleasas como control negativo.

C) Sella los tubos con tapas ópticas o placa de 96 pozos con película de sellado óptico (no suministrada).

D) Vorticear los tubos a baja velocidad durante 10 a 15 segundos, centrifugar a 3000 rpm durante 20 segundos y colocarlos en un instrumento de PCR en tiempo real.

3) Configuración de RT-PCR: Establezca el volumen de reacción como 25μl y el procedimiento de amplificación de PCR como se muestra a continuación.Fluorescencia de ROX (para Orf1ab) y CY5 (para el gen RNasa P) a 60°C, y seleccione NO como referencia pasiva.
4) Análisis e interpretación de los resultados Establecer la línea de umbral de acuerdo con las instrucciones del instrumento.

A) Control de calidad:

B) Interpretación del resultado de la muestra

Parámetros técnicos: